See veebileht kasutab küpsiseid kasutaja sessiooni andmete hoidmiseks. Veebilehe kasutamisega nõustute ETISe kasutustingimustega. Loe rohkem
Olen nõus
"Eesti Teadusfondi uurimistoetus (ETF)" projekt ETF7694
ETF7694 "Valk-valk interaktsioonid maomürgi närvi kasvu faktoriga (1.01.2008−31.12.2011)", Ene Siigur, Keemilise ja Bioloogilise Füüsika Instituut.
ETF7694
Valk-valk interaktsioonid maomürgi närvi kasvu faktoriga
Protein-protein interactions of snake venom nerve growth factor
1.01.2008
31.12.2011
Teadus- ja arendusprojekt
Eesti Teadusfondi uurimistoetus (ETF)
ETIS klassifikaatorAlamvaldkondCERCS klassifikaatorFrascati Manual’i klassifikaatorProtsent
1. Bio- ja keskkonnateadused1.1. BiokeemiaP310 Proteiinid, ensümoloogia1.5. Bioteadused (bioloogia, botaanika, bakterioloogia, mikrobioloogia, zooloogia, entomoloogia, geneetika, biokeemia, biofüüsika jt100,0
AsutusRollPeriood
Keemilise ja Bioloogilise Füüsika Instituutkoordinaator01.01.2008−31.12.2011
PerioodSumma
01.01.2008−31.12.2008285 600,00 EEK (18 253,17 EUR)
01.01.2009−31.12.2009274 176,00 EEK (17 523,04 EUR)
01.01.2010−31.12.2010274 176,00 EEK (17 523,04 EUR)
01.01.2011−31.12.201117 523,60 EUR
70 822,85 EUR

Käesoleva projekti eesmärgiks on maomürkide närvikasvu faktori (NGF) ja tema kompleksi toime uurimine mitteneuraalsetele valkudele ja rakkudele. Vipera lebetina mürgist eraldatud närvikasvu faktori aktiivsust omav preparaat on kompleks, millel on peale NGF aktiivsuse veel arginiinesteraasne aktiivsus. Oleme leidnud, et mürginäärmest kloneeritud cDNA on analoogne teiste maomürkide NGFide cDNAdega. Kasutades NGFi kodeerivat cDNAd ekspresseerime kasvufaktori bakteriaalses ja Pichia pastorise ekspressioonisüsteemides. NGFkompleks ja NGFeraldatakse mürgist ja ekspressioonisegust, kombineerides erinevaid meetodeid - geelfiltratsiooni, ioonvahetust, isoelektrilist fokuseerimist, kõrgsurve (HPLC) ja ülikõrgsurve (UPLC) vedelikkromatograafiat. Määratakse kompleksi komponentide primaarne struktuur neid kodeerivate DNA-de kaudu, kasutades mürginäärme cDNA panka, ja ka peptiidide otsese sekveneerimise kaudu Edmani degradatsiooni ja LC-MS/MS abil. Rekombinantse NGFi antikehasid kasutame NGFi detekteerimisel ja interaktsioonide uurimisel erinevate valkudega. Uurime NGF ja NGF kompleksi toimet trombotsüütidele, endoteeli- ja vähirakkudele. Projekti tulemused on olulised valk –valk interaktsioonide mõistmisel ja uute ravimite disainimisel.
The project is aimed at the study of snake venom nerve growth factor (NGF) and its complex interactions with non-neuronal proteins and cells. NGF preparation isolated from Vipera lebetina venom has besides NGF activity arginine esterase activity. We have found that NGF coding cDNA from Vipera lebetina is very similar to other cloned snake NGF cDNAs. Using the cDNA encoding NGF, recombinant NGF will be expressed in bacterial and Pichia pastoris expression systems. NGF from the venom and from expression mixture will be isolated using different protein purification methods such as size exclusion, ion exchange and affinity chromatographies, isoelectric focusing, HPLC and UPLC techniques. The primary structure of the complex components will be deduced from the cDNAs encoding the complex proteins using cDNA library and also by primary sequencing of peptides using Edman degradation and LC- MS/MS technique. The interactions of NGF and its complex with cells will be studied using platelets, human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) and different tumor cells. The interactions of recombinant NGF with different proteins will be studied using antibodies against recombinant NGF. The results of the project will be essential for protein-protein interaction fundamental studies and for designing of new drugs.