"Eesti Teadusfondi uurimistoetus" projekt ETF7251
ETF7251 "Biomeditsiiniliselt olulised valgud ja peptiidid madude mürkidestl (1.01.2007−31.12.2010)", Jüri Siigur, Keemilise ja Bioloogilise Füüsika Instituut.
ETF7251
Biomeditsiiniliselt olulised valgud ja peptiidid madude mürkidestl
Biomedically important proteins and peptides from snake venoms
1.01.2007
31.12.2010
Teadus- ja arendusprojekt
Eesti Teadusfondi uurimistoetus
ETIS klassifikaatorAlamvaldkondCERCS klassifikaatorFrascati Manual’i klassifikaatorProtsent
1. Bio- ja keskkonnateadused1.1. BiokeemiaP310 Proteiinid, ensümoloogia1.5. Bioteadused (bioloogia, botaanika, bakterioloogia, mikrobioloogia, zooloogia, entomoloogia, geneetika, biokeemia, biofüüsika jt100,0
AsutusRollPeriood
Keemilise ja Bioloogilise Füüsika Instituutkoordinaator01.01.2007−31.12.2010
PerioodSumma
01.01.2007−31.12.2007180 000,00 EEK (11 504,10 EUR)
01.01.2008−31.12.2008228 000,00 EEK (14 571,86 EUR)
01.01.2009−31.12.2009218 880,00 EEK (13 988,98 EUR)
01.01.2010−31.12.2010218 880,00 EEK (13 988,98 EUR)
54 053,92 EUR

Käesoleva projekti eesmärgiks on uute biomeditsiinis võimalikku kasutust leidvate unikaalsete antitrombootiliste ja antikantserogeensete valkude ja peptiidide molekulaarsete ja funktsionaalsete omaduste uurimine. Ained eraldatakse madude mürkidest, kombineerides erinevaid meetodeid - geelfiltratsiooni, ioonvahetust, isoelektrilist fokuseerimist, kõrgsurve (HPLC) ja ülikõrgsurve (UPLC) vedelikkromatograafiat, afiinsuskromatograafiat. Määratakse eraldatud valkude ja peptiidide primaarne struktuur neid kodeeriva DNA kaudu, kasutades mürginäärme cDNA panka,kui ka peptiidide otsese sekveneerimise kaudu Edmani degradatsiooni ja LC-MS/MS abil. Eraldatud valkude ja peptiidide rakulise toime uurimisel kasutatakse trombotsüüte, HUVEC rakke ja erinevaid vähirakke. Selgitame, millist funktsionaalset rolli omavad meie poolt avastatud endoteeli rakkude apoptoosi indutseeriva metalloproteinaasi VLAIP erinevad domeenid. Ekspresseerime meie poolt kloneeritud valgud ja nende domeenid, kasutades Pichia pastorise ja bakteriaalseid ekspressioonisüsteeme. Uurime ekspresseeritud valkude ja peptiidide toimet nii normaalsetele kui ka vähirakkudele. Projekti tulemused on olulised valk –valk interaktsionide mõistmisel. Angiogeneesi ja trombotsüütide agregatsiooni inhibiitorid ( näiteks erinevad disintegriinid) on potentsiaalsed antitrombootilised ja vähi rakkudele mõjuvad ained.
The project is aimed at the study of molecular and functional properties of novel proteins and peptides which have biomedical importance as potential antithrombotic and antitumor drugs. The proteins will be separated from snake venoms using protein purification methods such as size-exclusion, ion-exchange and affinity chromatographies, isoelectric focusing, HPLC and UPLC techniques. The primary structure of the proteins and peptides will be deduced from the cDNA encoding the protein using cDNA library and by primary sequencing of peptide using Edman degradation and LC- MS/MS technique. The protein interactions with cells will be detected using platelets, human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) and different tumor cells. The mechanism of action of different domains of the endothelial apoptosis inducing metalloproteinase VLAIP will be clarified. We plan to obtain recombinant proteins and their domains using Pichia pastoris and bacterial expression systems. The interactions of recombinant proteins and their domains with normal and cancer cells and with integrins will be studied. The results of the project will be essential for protein-protein interaction fundamental studies. The inhibitors of angiogenesis and platelet aggregation (e.g. disintegrins) may be potential antitumor and antithrombotic drugs.