"Eesti Teadusfondi uurimistoetus" projekt ETF6903
ETF6903 (ETF6903) "Papilloomiviiruste E2 valgu heterodimeeride ja repressorvormide funktsiooni uurimine (1.01.2006−31.12.2009)", Aare Abroi, Eesti Biokeskus.
ETF6903
Papilloomiviiruste E2 valgu heterodimeeride ja repressorvormide funktsiooni uurimine
Investigation of the papillomavirus E2 heterodimers and repressor forms
1.01.2006
31.12.2009
Teadus- ja arendusprojekt
Eesti Teadusfondi uurimistoetus
ETIS klassifikaatorAlamvaldkondCERCS klassifikaatorFrascati Manual’i klassifikaatorProtsent
1. Bio- ja keskkonnateadused1.12. Bio- ja keskkonnateadustega seotud uuringud, näiteks biotehnoloogia, molekulaarbioloogia, rakubioloogia, biofüüsika, majandus- ja tehnoloogiauuringud601 1.3. Keemiateadused (keemia ja muud seotud teadused)100,0
AsutusRollPeriood
Eesti Biokeskuskoordinaator01.01.2006−31.12.2009
PerioodSumma
01.01.2006−31.12.2006185 760,00 EEK (11 872,23 EUR)
01.01.2007−31.12.2007185 760,00 EEK (11 872,23 EUR)
01.01.2008−31.12.2008187 800,00 EEK (12 002,61 EUR)
01.01.2009−31.12.2009180 288,00 EEK (11 522,50 EUR)
47 269,57 EUR

Papilloomiviirused (PV) on patogeenid, mis tekitavad kasvajaid nii epiteel- kui limaskudedes, olles sealhulgas ka emakakaelavähi põhjustajateks. Viiruse regulaatorvalk E2 on viiruse nukleiinhapete metabolismi peamine viiruslik regulaator. Lisaks täispikale E2-le on nii veise kui inimese PV kirjeldatud ka E2 lühemad, nn. repressorvormid, mis ei sisalda enamikeks aktiivsusteks vajalikku aktivatsioonidomeeni. Repressorvormid sisaldavad täispika E2-ga identset DNA-ga seondumisdomeeni, mille kaudu toimub ka dimerisatsioon. Veise papillooomiviiruse (BPV) puhul on näidatud, et erineva pikkusega E2 polüpeptiidid võivad anda heterodimeere. Ainukese papilloomiviirusena on seni täispikka E2 ning repressorvormide suhet mõõdetud BPV-l. Erinevate gruppide ja erinevate rakuliinide korral on nende suhe pisut erinev, kuid repressorvorme on alati vähemalt 10 korda rohkem kui täispikka E2. Kui heterodimeeride formeerumine toimub samasuguse efektiivsusega nagu homodimeeride tekkimine, peaks täispika E2 peamine esinemisvorm olema heterodimeerne. Seni ei ole heterodimeeride ja repressorite funktsioone ja aktiivsusi eriti põhjalikult uuritud, kuigi nii HPV31 kui BPV1 puhul on näidatud, et repressorvormide puudumisel viirusgenoom enam episoomina ei säilu. Käesoleva töö eesmärgiks ongi välja selgitada heterodimeeride ja repressorvormide biokeemilised aktiivsused ja funktsioonid, et saada rohkemat teavet nende rolli kohta viiruse elütsüklis. Täispikka E2 sisaldava heterodimeeri mudelina kasutame mitte kahe valgu üheaegset ekspressiooni, vaid polüpeptiidi, kus kaks DNA-d siduvat domeeni on fuseeritud üksteise järel. Sellisel valgul on intaktne DNA-d siduv domeen ning ainult üks aktivatsioonidomeen nagu ka täispika E2 heterodimeeril. Sellise lähenemise juures ei esine süsteemis homodimeere mis segavad tulemuste ühest interpreteerimist ning me saame korrektselt iseloomustada E2 heterodimeere mitmetes funktsionaalsetes katsetes.
Papillomaviruses (PV) are the causative agents of warts, papillomas and cervical cancer. The viral regulatory protein E2 is the major coordinator of viral nucleic acid metabolism. For bovine, as well as for human PV-s, in addition to full-length E2 shorter repressorforms are described. These repressorforms do not contain an E2 transactivation domain (TAD), which is required for most of the E2 activities. The repressorforms share the DNA binding domain (DBD) with full-length E2. E2 (full-length and repressors) dimerises through the common DBD. In case of bovine PV (BPV) it has been shown that the truncated (artificial) form of E2 with different length forms heterodimers. So, also the full-length E2 may form heterodimers with its repressors. The ratio of the full-length E2 to repressors has been measured only in case of BPV. The exact ratio depends on the cell-line and group, however, the level of repressors is in any case at least 10 times higher than the level of the full-length E2. So, if the formation of homo- and heterodimers occurs with the same efficiency, the major form of full-length E2 is its heterodimer with repressors. Until now the role and function of the heterodimers is not well understood (and also not studied), despite the fact that in the absence of the repressors the BPV and HPV31 failed to maintain their genomes as episomal plasmids. The aim of the current study is to find out the functions and biochemical activities of the E2 heterodimers and repressors to explain their role in viral life-cycle. As a model for heterodimers we plan to use an E2 polypeptide where the extra DBD is fused to the C-terminus of the full-length E2. Such polypeptide forms pseudodimeric and functional DBD and, like a native E2 heterodimer, contains only a single TAD. In this way we shall overcome the difficulties arising in case of coexpressing full-length and repressor forms (simultaneous presence of heterodimers and two type of homodimers)and get a lot of new information on fuctioning of E2 heterodimers.